使用其他方式登錄
0元試用??！
掃碼或點擊鏈接填寫試用申請表
腫瘤細胞轉(zhuǎn)移主要包括以下5個過程：
原位侵襲（Local invasion），
腫瘤細胞內(nèi)滲（Intravasation），
循環(huán)系統(tǒng)存活（Survival in the circulation），
腫瘤細胞外滲（Extravasation），
形成轉(zhuǎn)移灶（Micrometastasis formation）等。
其中細胞侵襲發(fā)生在第一步，即腫瘤細胞在原位突破基底膜，然后內(nèi)滲進入血管、淋巴管的過程。其侵襲性是腫瘤相關(guān)信號通路、藥物治療、靶向治療、致癌/抑癌基因等腫瘤學研究的一個重要指標。
（腫瘤細胞轉(zhuǎn)移過程，來源DOI:10.1016/j.cell.2011.09.024）
腫瘤細胞侵襲實驗通常利用細胞小室（常用6孔、12孔、24孔板等）進行檢測。
與腫瘤細胞遷移實驗不同的是，需在聚碳酸酯膜上側(cè)鋪一層基質(zhì)膠，用以模仿細胞外基質(zhì)。
腫瘤細胞必須分泌基質(zhì)金屬蛋白酶（MMPs）消化基質(zhì)才能進入下室，更好的模擬了動物體內(nèi)的情況。
侵襲實驗過程
向上滑動閱覽
a. 基質(zhì)膠包被：
(a) 將基質(zhì)膠置于冰中并在4℃融化，使用預冷的移液管或吸頭混合基質(zhì)膠至均勻狀態(tài)。(b) 在冰上，將基質(zhì)膠用無血清培養(yǎng)液按照1:8的比例進行稀釋，例如取8μl基質(zhì)膠加入64μl不含血清的培養(yǎng)液中，使用預冷的吸頭混合至均勻狀態(tài)。
注：常用的稀釋比例為1:4、1:6、1:8，可根據(jù)實驗具體情況調(diào)整稀釋比例。(c) 取60μL上述混合溶液垂直加入細胞小室中，使其均勻平鋪在底部。
(d) 吸出未結(jié)合的基質(zhì)膠。
(e) 加入100μl不含血清的培養(yǎng)液，將培養(yǎng)板置于37℃培養(yǎng)箱孵育30分鐘，進行水化。(f) 去除小室中液體，檢查是否有液體穿過小室進入到下室中，若沒有，則可用于接種細胞。
b. 細胞懸液的制備：(a) 對細胞進行12-24小時的饑餓處理。（非必需步驟）(b) 消化細胞，用不含血清的培養(yǎng)液重懸，調(diào)整細胞密度為5-50萬個/mL。
c. 細胞接種：(a) 取500μL含10% FBS的培養(yǎng)液加入24孔板下室，用鑷子將細胞小室置于24孔板內(nèi)。
(b) 取200μL細胞懸液加入細胞小室。(c) 將24孔板置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24-48小時。
d. 細胞固定、染色：(a) 取出細胞小室，去除培養(yǎng)液，用棉簽輕輕擦拭基質(zhì)膠及細胞。(b) 在24孔板干凈的孔中加入600μl 4%多聚甲醛固定液，將小室放入固定20-30分鐘。(c) 棄固定液，PBS洗滌小室1次。
(d) 在24孔板干凈的孔中加入適量結(jié)晶紫染色液，將小室放入染色5-10分鐘。(e) 取出小室，PBS洗滌3次。
(f) 適當風干后，顯微鏡下觀察并計數(shù)。
除細胞侵襲實驗外，基質(zhì)膠可被用于類器官培養(yǎng)、干細胞分化、血管生成、體內(nèi)腫瘤發(fā)生等多項研究。
